.RU

В 2 лияние ионов двухвалентнных металлов на активность металлопротеиназы MprBi



^ В
2
лияние ионов двухвалентнных металлов на активность металлопротеиназы MprBi

Изучение влияния ионов двухвалентных металлов на активность фермента показало, что ионы Са2+ и Mg2+ в концентрации 10 мМ повышают активность белка на 30 и 20% соответственно. Ионы Со2+, Сu2+ и Ni2+ в концентрациях от 1 до 20 мМ снижают активность металлопротеиназы, причем, с увеличением концентрации это снижение более значительно. Низкие концентрации ионов Zn2+ (0,01 мМ) практически не влияют на активность фермента, увеличение же его концентрации приводит к резкому снижению активности (рис. 10)


1 2 3 4 5 6


Рис. 10. Влияние ионов двухвалентных металлов на активность металлопротеиназы MprBi. За 100% принимали активность белка в отсутствии в реакционной смеси ионов металла. 1 – Zn2+; 2- Ca2+; 3 – Mg2+; 4 – Co2+; 5 – Cu2+; 6 – Ni2+;


Таким образом, в результате проведенной работы был получен гомогенный препарат металлоэндопептидазы MprBi, секретируемой рекомбинантным штаммом B. subtilis BG 2036 (pSA1). На основании определения и анализа первичной структуры MprBi установлено, что исследуемая нами рекомбинантная металлопротеиназа относится к семейству адамализинов/репролизинов клана метцинкинов класса цинкзависимых протеиназ и является первым представителем данного семейства у прокариот в целом и у бацилл в частности. Однако, структурные особенности этого фермента (Tyr в Met повороте и N-концевой Ala1) сближают его с эндопептидазами астацинового семейства. Возможно, подобное смешение признаков является ключевой особенностью бациллярных адамализиноподобных эндопептидаз.


ВЫВОДЫ

  1. Подобран состав питательной среды, обеспечивающий высокий уровень продукции металлоэндопептидазы B. intermedius в культуральной жидкости рекомбинантного штамма B. subtilis.

  2. Выделена и очищена гомогенная металлоэндопептидаза MprBi со степенью очистки 350 и выходом 11,3%. Молекулярная масса металлоэндопептидазы составляет 19 kDa.

  3. Методом MALDI-TOF спектрометрии установлена аминокислотная последовательность MprBi, определена N-концевая последовательность зрелого фермента. Фермент классифицирован как металлоэндопептидаза семейства адамализинов/репролизинов клана метцинкинов цинкзависимых металлопротеиназ.

  4. Установлено, что металлопротеиназа MprBi обладает широкой субстратной специфичностью по гидролизу синтетических и природных субстратов.

  5. Установлено, что металлоэндопептидаза MprBi является щелочным термостабильным ферментом, активность которого зависит от присутствия ионов двухвалентных металлов. рН-Оптимум действия фермента лежит к области рН 8,0, интервал стабильности MprBi 22-55 ºС.


Работы, опубликованные по теме диссертации


  1. Mikhailova, E.O. Purification of a subtilisin-like serine proteinase from recombinant Bacillus subtilis during different phases of growth / E.O. Mikhailova, N.P. Balaban, A.M. Mardanova, N.L. Rudakova, O.N. Ilyinskaya, G.N. Rudenskaya, A.A. Rizvanov, M.R. Sharipova // Annals of Microbiology, - 2009 – V.59,№2, - P.301-307.

  2. Балабан, Н.П. Металлоэндопептидазы клана метцинкинов: классификация, свойства, структурные особенности / Н.П. Балабан, Н.Л. Рудакова, А.Р. Сабирова, О.Н. Ильинская, М.Р. Шарипова // Учен. зап. Казан. ун-та. Сер. Естеств. науки. – 2010. – Т.152, кн.2. – С. 57-77.

  3. Рудакова, Н.Л. Секретируемая металлоэндопептидаза Bacillus intermedius: получение гомогенного препарата фермента и исследование физико-химических свойств / Н.Л. Рудакова, А.Р. Сабирова, А.Р. Каюмов, А.М. Марданова, Н.П. Балабан, М.Р. Шарипова // Учен. зап. Казан. ун-та. Сер. Естеств. науки. – 2010. – Т.152, кн.2. – С. 145-154.

  4. Рудакова, Н.Л. Характеристика цинкзависимой эндопептидазы Bacillus intermedius / Н.Л. Рудакова, Н.П. Балабан, Ю.В. Данилова, Г.Н. Руденская, М.Р. Шарипова // Биохимия. – 2010. – Т.75,№10. – С.1462-1470.

  5. Sabirova A.R., Rudakova N.L. A novel secreted metalloproteinase Bacillus intermedius / A.R. Sabirova, N.L. Rudakova, N.P. Balaban, O.N. Ilinskaya, I.V. Demiduyk, S.V. Kostrov, G.N. Rudenskaya, M.R. Sharipova // FEBS letters. – 2010. – V.584, №21. – P.4419-4425.

  6. Рудакова, Н.Л. Протеиназы Bacillus intermedius 3-19 на поздних стадиях роста / Н.Л. Рудакова, Е.А. Соколова, Н.П. Балабан // Тезисы докладов IV научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов научно-образовательного центра Казанского государственного университета «Материалы и технологии XXI века». – Казань, 2004. – С.66.

  7. Соколова, Е.А. Каталитические и биологические свойства субтилизинов Bacillus intermedius 3-19 / Е.А. Соколова, Н.Л. Рудакова, Е.Л. Ицкович, Н.П. Балабан, М.Р. Шарипова // Материалы научной конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии». – Казань, 2004. –С.24.

  8. Рудакова, Н.Л. Влияние компонентов питательной среды на продукцию субтилизина Bacillus intermedius 3-19 поздней стационарной фазы роста / Н.Л. Рудакова, Е.А. Соколова, Н.П. Балабан, А.М. Марданова, М.Р. Шарипова // Материалы научной конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии». – Казань, 2004. –С.73.

  9. Рудакова, Н.Л. Протеиназы Bacillus intermedius 3-19 на поздних стадиях роста / Н.Л. Рудакова, Е.А. Соколова // Материалы XLII международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс». – Новосибирск, 2004. – С.33. (Диплом III степени)

  10. Рудакова, Н.Л. Среда для биосинтеза металлопротеиназы Bacillus intermedius рекомбинантным штаммом Bacillus subtilis / Н.Л. Рудакова, Е.А. Соколова, Н.П. Балабан, М.Р. Шарипова // Материалы V республиканской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Наука. Инновации. Бизнес». – Казань, 2005. – С.66.

  11. Рудакова, Н.Л. Получение металлопротеиназы Bacillus intermedius из культуральной жидкости рекомбинантного штамма Bacillus subtilis / Н.Л. Рудакова, Н.П. Балабан, М.Р. Шарипова // Тезисы докладов и стендовых сообщений VI симпозиума «Химия протеолитических ферментов». - Москва, 2007. - С.76.

  12. Рудакова, Н.Л. Гетерологичная экспрессия гена нейтральной протеазы Bacillus intermedius в клетках Bacillus subtilis / Н.Л. Рудакова, А.Р. Сабирова, Н.П. Балабан, М.Р. Шарипова // Материалы конференции «Ломоносов-2007». – Москва, 2007. – С.18.

  13. Рудакова, Н.Л. Выделение и очистка металлопротеиназы B. intermedius из культуральной жидкости рекомбинантного штамма B. subtilis BG 2036 / Н.Л. Рудакова, Ю.В. Данилова // Материалы конференции «Ломоносов-2009». – Москва, 2009. – С.11.

  14. Рудакова, Н.Л. Новая металлопротеиназа Bacillus intermedius / Н.Л. Рудакова, А.Р. Сабирова, Ю.В. Данилова, Н.П. Балабан, М.Р. Шарипова // Тезисы докладов IV Российского симпозиума «Белки и пептиды». – Казань, 2009. – С.298. (Грамота за лучший доклад).

  15. Шарипова, М.Р. Особенности регуляции функциональной активности и экспрессии генов протеиназ в условиях стресса у бацилл / М.Р. Шарипова, А.А. Тойменцева, А.Р. Каюмов, А.Р. Сабирова, Н.Л. Рудакова, Н.П. Балабан // Тезисы докладов IV Российского симпозиума «Белки и пептиды». – Казань, 2009. – С.96.

  16. Рудакова, Н.Л. Новая секретируемая металлоэндопептидаза Bacillus intermedius / Н.Л. Рудакова, Н.П. Балабан // Тезисы докладов Российской школы молодых ученых «Актуальные проблемы современной биохимии и молекулярной биологии». – Казань, 2010. – С.50.

voprosi-i-zadaniya-prednaznacheno-posobie-uchitelyam-predmetnikam-6-11-klassov-obsheobrazovatelnih-shkol-klassnim.html
voprosi-i-zadaniya-stranica-10.html
voprosi-i-zadaniya-stranica-16.html
voprosi-i-zadaniya-stranica-21.html
voprosi-i-zadaniya-uchebnaya-programma-po-kursu-politologiya-dlya-vseh-specialnostej-ochnogo-otdeleniya-ochnoe-otdelenie.html
voprosi-i-zadaniya-uchebnoe-posobie-izdanie-trete-dopolnennoe-i-pererabotannoe-dopusheno-ministerstvom-obrazovaniya.html
  • shkola.bystrickaya.ru/problema-razvitiya-malogo-biznesa-obshegosudarstvennie-i-regionalnie-aspekti.html
  • bukva.bystrickaya.ru/ponyatie-elementi-i-vidi-iskov.html
  • znaniya.bystrickaya.ru/rabochaya-programma-disciplini-modulya-statisticheskaya-obrabotka-dannih-poslevuzovskogo-professionalnogo-obrazovaniya-po-specialnosti.html
  • assessments.bystrickaya.ru/dizelya-dkrn-80160-na-polnom-hodu-pmi-dvigatelya-pri-djkvmt-10pkv-povishenie-effektivnosti-ekspluatacii-glavnih.html
  • spur.bystrickaya.ru/lekciya-5-kapitalnie-vlozheniya-istochniki-i-formi-ih-finansirovaniya.html
  • ekzamen.bystrickaya.ru/rekreacionnij-potencial-territorii-rukovodstvo-po-organizacii-selskogo-turisticheskogo-biznesa-v-altajskom-krae.html
  • credit.bystrickaya.ru/p-o-l-o-zh-e-n-i-e-polozhenie-o-provedenii-gorodskogo-konkursa-detskogo-tvorchestva-policiya-glazami-detej.html
  • otsenki.bystrickaya.ru/rekomendacii-po-proektirovaniyu-i-ispolzovaniyu-ocenochnih-sredstv-pri-realizacii-osnovnoj-obrazovatelnoj-programmi-visshego-professionalnogo-obrazovaniya-oop-vpo-novogo-pokoleniya-moskva-2013.html
  • bystrickaya.ru/zhirinovskij-izvinilsya-pered-veteranami-boris-grizlov-monitoring-smi-16-18.html
  • control.bystrickaya.ru/chast-22-zhilson-e-filosofiya-v-srednie-veka-ot-istokov-patristiki-do-konca-xiv-veka-eten-zhilson.html
  • grade.bystrickaya.ru/novie-postupleniya-v-biblioteku-igmu-dekabr-2010-g.html
  • spur.bystrickaya.ru/magisterskaya-programma-avtomobilnij-servis-annotaciya-disciplini-sovremennie-problemi-i-napravleniya-razvitiya-konstrukcij-transportnih-i-transportno-tehnologicheskih-mashin-naimenovanie-disciplini.html
  • reading.bystrickaya.ru/literatura-xviii-veka.html
  • teacher.bystrickaya.ru/glava-2-razmer-i-slog-1-chtobi-pisat-horoshie-stihi-nuzhno-ochen-mnogo-chitat-horoshih-stihov-eto-samoe-glavnoe-pravilo.html
  • institut.bystrickaya.ru/stenogramma-parlamentskih-slushanij-perspektivi-razvitiya-normativno-pravovoj-bazi-v-sfere-ekologicheskogo-strahovaniya.html
  • otsenki.bystrickaya.ru/specifikaciya-apparatnogo-obespecheniya-vichislitelnogo-yadra-mezhvedomstvennogo-rezerviruemogo-cod.html
  • desk.bystrickaya.ru/plan-raboti-zapadnogo-okruzhnogo-upravleniya-obrazovaniya-departamenta-obrazovaniya-goroda-moskvi-omc-zouo-do-goroda-moskvi-strukturnih-podrazdelenij-zouo-do-goroda-moskvi-na-2010-2011-uchebnij-god-stranica-11.html
  • paragraph.bystrickaya.ru/metodicheskie-razrabotki-kafedri-fizika.html
  • grade.bystrickaya.ru/o-provedenii-konkursov-v-ministerstve-stroitelstva-arhitekturi-i-zhilishno-kommunalnogo-hozyajstva-respubliki-tatarstan-stranica-3.html
  • shkola.bystrickaya.ru/puti-uluchsheniya-ispolzovaniya-osnovnih-fondov-predpriyatij-neftegazovoj-otrasli-respubliki-kazahstan.html
  • kolledzh.bystrickaya.ru/a-mozhet-zavtra-pospeshish-royalty.html
  • bukva.bystrickaya.ru/organizacionno-ekonomicheskie-rezervi-povisheniya-efektivnosti-proizvodstva-produkcii-v-myasnom-skotovodstve-na-primere-kolhoza-im-chapaeva-ulyanovskoj-obl-chast-9.html
  • shkola.bystrickaya.ru/simfonicheskoe-tvorchestvo-skryabina-bozhestvennaya-poema-chast-2.html
  • tests.bystrickaya.ru/kommentarii-k-shestoj-knige-sobitiya-53-goda-do-n-e-kniga-pervaya.html
  • testyi.bystrickaya.ru/9-viplata-rabotnikam-pomoshi-iz-gosudarstvennogo-socialnogo-strahovaniya-obshie-polozheniya.html
  • report.bystrickaya.ru/kazhdij-raz-kogda-ya-poluchayu-iz-tipografii-dolgozhdannie-korobki-so-svoimi-knigami-i-beru-ih-v-ruki-u-menya-vnutri-voznikayut-udivitelnie-chuvstva-zdes-stranno-p-stranica-16.html
  • lecture.bystrickaya.ru/68-ocenka-ekonomicheskoj-celesoobraznosti-provedeniya-rabot-perechen-sokrashenij-simvolov-i-specialnih-terminov-8.html
  • literatura.bystrickaya.ru/rudno-predstavit-chto-kogda-to-na-meste-znamenitih-egipetskih-piramid-bilo-rovnoe-skalistoe-plato-no-tak-bilo-ibili-lyudi-reshivshie-sotvorit-iskusstvennie-go.html
  • essay.bystrickaya.ru/dolgosrochnaya-celevaya-programma-formirovanie-zdorovogo-obraza-zhizni-u-grazhdan-tambovskoj-oblasti-vklyuchaya-sokrashenie-potrebleniya-alkogolya-i-tabaka-na-2009-2011-godi.html
  • university.bystrickaya.ru/gerakl-i-50-devstvennic-zabavi-erota-lyubovnie-istorii-iz-zhizni-carej-polkovodcev-i-mudrecov.html
  • prepodavatel.bystrickaya.ru/turbokompressori-optom-zayavki-ot-50000-rub.html
  • pisat.bystrickaya.ru/tematicheskie-zanyatiya-v-vihodnie-dni-445011-rossijskaya-federaciya-samarskaya-oblast-pl-svobodi-4-kab7.html
  • textbook.bystrickaya.ru/karta-proizvodstva-i-kontrolya-kachestva-ishodnih-komponentov-normativnie-dokumenti-po-stroitelstvu-obektov-banka.html
  • laboratornaya.bystrickaya.ru/programma-razvitiya-municipalnogo-obsheobrazovatelnogo-uchrezhdeniya-srednej-obsheobrazovatelnoj-shkoli-s-zorkino-marksovskogo-rajona-saratovskoj-oblasti-prinyata-na-zasedanii.html
  • ekzamen.bystrickaya.ru/sila-treniya.html
  • © bystrickaya.ru
    Мобильный рефератник - для мобильных людей.