.RU

В 2 лияние ионов двухвалентнных металлов на активность металлопротеиназы MprBi



^ В
2
лияние ионов двухвалентнных металлов на активность металлопротеиназы MprBi

Изучение влияния ионов двухвалентных металлов на активность фермента показало, что ионы Са2+ и Mg2+ в концентрации 10 мМ повышают активность белка на 30 и 20% соответственно. Ионы Со2+, Сu2+ и Ni2+ в концентрациях от 1 до 20 мМ снижают активность металлопротеиназы, причем, с увеличением концентрации это снижение более значительно. Низкие концентрации ионов Zn2+ (0,01 мМ) практически не влияют на активность фермента, увеличение же его концентрации приводит к резкому снижению активности (рис. 10)


1 2 3 4 5 6


Рис. 10. Влияние ионов двухвалентных металлов на активность металлопротеиназы MprBi. За 100% принимали активность белка в отсутствии в реакционной смеси ионов металла. 1 – Zn2+; 2- Ca2+; 3 – Mg2+; 4 – Co2+; 5 – Cu2+; 6 – Ni2+;


Таким образом, в результате проведенной работы был получен гомогенный препарат металлоэндопептидазы MprBi, секретируемой рекомбинантным штаммом B. subtilis BG 2036 (pSA1). На основании определения и анализа первичной структуры MprBi установлено, что исследуемая нами рекомбинантная металлопротеиназа относится к семейству адамализинов/репролизинов клана метцинкинов класса цинкзависимых протеиназ и является первым представителем данного семейства у прокариот в целом и у бацилл в частности. Однако, структурные особенности этого фермента (Tyr в Met повороте и N-концевой Ala1) сближают его с эндопептидазами астацинового семейства. Возможно, подобное смешение признаков является ключевой особенностью бациллярных адамализиноподобных эндопептидаз.


ВЫВОДЫ

  1. Подобран состав питательной среды, обеспечивающий высокий уровень продукции металлоэндопептидазы B. intermedius в культуральной жидкости рекомбинантного штамма B. subtilis.

  2. Выделена и очищена гомогенная металлоэндопептидаза MprBi со степенью очистки 350 и выходом 11,3%. Молекулярная масса металлоэндопептидазы составляет 19 kDa.

  3. Методом MALDI-TOF спектрометрии установлена аминокислотная последовательность MprBi, определена N-концевая последовательность зрелого фермента. Фермент классифицирован как металлоэндопептидаза семейства адамализинов/репролизинов клана метцинкинов цинкзависимых металлопротеиназ.

  4. Установлено, что металлопротеиназа MprBi обладает широкой субстратной специфичностью по гидролизу синтетических и природных субстратов.

  5. Установлено, что металлоэндопептидаза MprBi является щелочным термостабильным ферментом, активность которого зависит от присутствия ионов двухвалентных металлов. рН-Оптимум действия фермента лежит к области рН 8,0, интервал стабильности MprBi 22-55 ºС.


Работы, опубликованные по теме диссертации


  1. Mikhailova, E.O. Purification of a subtilisin-like serine proteinase from recombinant Bacillus subtilis during different phases of growth / E.O. Mikhailova, N.P. Balaban, A.M. Mardanova, N.L. Rudakova, O.N. Ilyinskaya, G.N. Rudenskaya, A.A. Rizvanov, M.R. Sharipova // Annals of Microbiology, - 2009 – V.59,№2, - P.301-307.

  2. Балабан, Н.П. Металлоэндопептидазы клана метцинкинов: классификация, свойства, структурные особенности / Н.П. Балабан, Н.Л. Рудакова, А.Р. Сабирова, О.Н. Ильинская, М.Р. Шарипова // Учен. зап. Казан. ун-та. Сер. Естеств. науки. – 2010. – Т.152, кн.2. – С. 57-77.

  3. Рудакова, Н.Л. Секретируемая металлоэндопептидаза Bacillus intermedius: получение гомогенного препарата фермента и исследование физико-химических свойств / Н.Л. Рудакова, А.Р. Сабирова, А.Р. Каюмов, А.М. Марданова, Н.П. Балабан, М.Р. Шарипова // Учен. зап. Казан. ун-та. Сер. Естеств. науки. – 2010. – Т.152, кн.2. – С. 145-154.

  4. Рудакова, Н.Л. Характеристика цинкзависимой эндопептидазы Bacillus intermedius / Н.Л. Рудакова, Н.П. Балабан, Ю.В. Данилова, Г.Н. Руденская, М.Р. Шарипова // Биохимия. – 2010. – Т.75,№10. – С.1462-1470.

  5. Sabirova A.R., Rudakova N.L. A novel secreted metalloproteinase Bacillus intermedius / A.R. Sabirova, N.L. Rudakova, N.P. Balaban, O.N. Ilinskaya, I.V. Demiduyk, S.V. Kostrov, G.N. Rudenskaya, M.R. Sharipova // FEBS letters. – 2010. – V.584, №21. – P.4419-4425.

  6. Рудакова, Н.Л. Протеиназы Bacillus intermedius 3-19 на поздних стадиях роста / Н.Л. Рудакова, Е.А. Соколова, Н.П. Балабан // Тезисы докладов IV научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов научно-образовательного центра Казанского государственного университета «Материалы и технологии XXI века». – Казань, 2004. – С.66.

  7. Соколова, Е.А. Каталитические и биологические свойства субтилизинов Bacillus intermedius 3-19 / Е.А. Соколова, Н.Л. Рудакова, Е.Л. Ицкович, Н.П. Балабан, М.Р. Шарипова // Материалы научной конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии». – Казань, 2004. –С.24.

  8. Рудакова, Н.Л. Влияние компонентов питательной среды на продукцию субтилизина Bacillus intermedius 3-19 поздней стационарной фазы роста / Н.Л. Рудакова, Е.А. Соколова, Н.П. Балабан, А.М. Марданова, М.Р. Шарипова // Материалы научной конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии». – Казань, 2004. –С.73.

  9. Рудакова, Н.Л. Протеиназы Bacillus intermedius 3-19 на поздних стадиях роста / Н.Л. Рудакова, Е.А. Соколова // Материалы XLII международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс». – Новосибирск, 2004. – С.33. (Диплом III степени)

  10. Рудакова, Н.Л. Среда для биосинтеза металлопротеиназы Bacillus intermedius рекомбинантным штаммом Bacillus subtilis / Н.Л. Рудакова, Е.А. Соколова, Н.П. Балабан, М.Р. Шарипова // Материалы V республиканской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Наука. Инновации. Бизнес». – Казань, 2005. – С.66.

  11. Рудакова, Н.Л. Получение металлопротеиназы Bacillus intermedius из культуральной жидкости рекомбинантного штамма Bacillus subtilis / Н.Л. Рудакова, Н.П. Балабан, М.Р. Шарипова // Тезисы докладов и стендовых сообщений VI симпозиума «Химия протеолитических ферментов». - Москва, 2007. - С.76.

  12. Рудакова, Н.Л. Гетерологичная экспрессия гена нейтральной протеазы Bacillus intermedius в клетках Bacillus subtilis / Н.Л. Рудакова, А.Р. Сабирова, Н.П. Балабан, М.Р. Шарипова // Материалы конференции «Ломоносов-2007». – Москва, 2007. – С.18.

  13. Рудакова, Н.Л. Выделение и очистка металлопротеиназы B. intermedius из культуральной жидкости рекомбинантного штамма B. subtilis BG 2036 / Н.Л. Рудакова, Ю.В. Данилова // Материалы конференции «Ломоносов-2009». – Москва, 2009. – С.11.

  14. Рудакова, Н.Л. Новая металлопротеиназа Bacillus intermedius / Н.Л. Рудакова, А.Р. Сабирова, Ю.В. Данилова, Н.П. Балабан, М.Р. Шарипова // Тезисы докладов IV Российского симпозиума «Белки и пептиды». – Казань, 2009. – С.298. (Грамота за лучший доклад).

  15. Шарипова, М.Р. Особенности регуляции функциональной активности и экспрессии генов протеиназ в условиях стресса у бацилл / М.Р. Шарипова, А.А. Тойменцева, А.Р. Каюмов, А.Р. Сабирова, Н.Л. Рудакова, Н.П. Балабан // Тезисы докладов IV Российского симпозиума «Белки и пептиды». – Казань, 2009. – С.96.

  16. Рудакова, Н.Л. Новая секретируемая металлоэндопептидаза Bacillus intermedius / Н.Л. Рудакова, Н.П. Балабан // Тезисы докладов Российской школы молодых ученых «Актуальные проблемы современной биохимии и молекулярной биологии». – Казань, 2010. – С.50.

voprosi-i-zadaniya-prednaznacheno-posobie-uchitelyam-predmetnikam-6-11-klassov-obsheobrazovatelnih-shkol-klassnim.html
voprosi-i-zadaniya-stranica-10.html
voprosi-i-zadaniya-stranica-16.html
voprosi-i-zadaniya-stranica-21.html
voprosi-i-zadaniya-uchebnaya-programma-po-kursu-politologiya-dlya-vseh-specialnostej-ochnogo-otdeleniya-ochnoe-otdelenie.html
voprosi-i-zadaniya-uchebnoe-posobie-izdanie-trete-dopolnennoe-i-pererabotannoe-dopusheno-ministerstvom-obrazovaniya.html
  • kanikulyi.bystrickaya.ru/yunie-patrioti-predislovie.html
  • report.bystrickaya.ru/ivan-sergeevich-turgenev-stranica-7.html
  • universitet.bystrickaya.ru/spravochnik-yahtsmena-perevod-s-anglijskogo-leningrad-sudostroenie-stranica-27.html
  • notebook.bystrickaya.ru/instrukciya-o-merah-pozharnoj-bezopasnosti-pri-provedenii-novogodnih-meropriyatij.html
  • write.bystrickaya.ru/fgbou-vpo-saratovskij-gosudarstvennij-universitet-imeni-n-g-chernishevskogo-ekonomicheskij-fakultet-utverzhdayu.html
  • pisat.bystrickaya.ru/statya-takti-istorii.html
  • paragraph.bystrickaya.ru/kursovaya-rabota-po-teme-iskazheniya-v-lampovih-tranzistornih-cifrovih-umzch.html
  • tetrad.bystrickaya.ru/vliyanie-innovacionnih-faktorov-na-tempi-ekonomicheskogo-rosta-rossii.html
  • credit.bystrickaya.ru/planirovanie-kadrovoj-raboti-i-marketing-personala-obespechenie-organizacii-kadrami-specialistov-trebuemoj-kvalifikacii-neobhodimogo-urovnya-i-napravlennosti-podgotovki.html
  • institut.bystrickaya.ru/tablica-2-harakteristiki-kontinentalnoj-modeli-posobie-po-organizacii-i-roli-sistem-torgovo-promishlennih-palat.html
  • occupation.bystrickaya.ru/nositeli-informacii-vidi-i-svojstva-informacii-kontrolnie-voprosi-po-teoreticheskomu-materialu-1-semestra-ponyatie.html
  • studies.bystrickaya.ru/klassifikaciya-karbonatnih-porod-i-biosedimentologiya-kak-osnova-regionalnogo-facialnogo-analiza.html
  • uchenik.bystrickaya.ru/frunzenskogo-rajona-sankt-peterburga-po-himii-oksid-alyuminiya.html
  • composition.bystrickaya.ru/otziv-rukovoditelya-posobie-po-podgotovke-i-zashite-kursovih-vipusknih-kvalifikacionnih-rabot-dlya-studentov-socialno-gumanitarnogo.html
  • notebook.bystrickaya.ru/institut-korrekcionnoj-pedagogiki-stranica-4.html
  • knowledge.bystrickaya.ru/nauchnih-priborov-kniga-otnositsya-k-chislu-nemnogih-rabot-osveshayushih-problemi-specificheskoj.html
  • znaniya.bystrickaya.ru/rasporyazhenie-ot-6-sentyabrya-2011-goda-515r-p-g-petrozavodsk.html
  • uchit.bystrickaya.ru/tema-osnovi-radiacionnoj-medicini-mediko-biologicheskie-posledstviya-oblucheniya.html
  • learn.bystrickaya.ru/glava-ks-valerij-zorkin-predlozhil-vvesti-novie-deputati-gosdumi-uvelichili-posobiya-po-beremennosti-do-23-tisyach-400-rublej.html
  • institut.bystrickaya.ru/takih-rodstvennih-svyazej-net-ezhekvartalnij-otchet-otkritoe-akcionernoe-obshestvo-komstar-obedinennie-telesistemi-kod-emitenta.html
  • obrazovanie.bystrickaya.ru/prodifferenciruem-po-vremeni-sootnoshenie-9-c-uchetom-13-i-imeya-vvidu-chto.html
  • assessments.bystrickaya.ru/e-mail-khstukhsturu-oficialnij-sajt-vuza-spravochnik-gosudarstvennih-visshih-uchebnih-zavedenij-s-akkreditovannimi.html
  • laboratornaya.bystrickaya.ru/racionalnoe-pitanie-4.html
  • shkola.bystrickaya.ru/ouvrages-a-consulter-plan-vvedenie-7-glava-teoriya-abbreviacii-v-lingvistike-25-problema-issledovaniya-sokrashennih.html
  • upbringing.bystrickaya.ru/kommunbitservis.html
  • school.bystrickaya.ru/diplom-po-grazhdanskomu-pravu-chast-11.html
  • literatura.bystrickaya.ru/sonetsdh-novogo-pokoleniya-klassifikaciya-kompyuternih-setej-klassifikaciya-topologicheskih-elementov-setej.html
  • institute.bystrickaya.ru/glava-12-sroki-v-grazhdanskom-prave-i-grazhdanskoe-pravo-otrasl-rossijskogo-prava-4-obshaya-harakteristika-otrasli.html
  • occupation.bystrickaya.ru/novie-tehnologii-zashiti-ot-shuma-zvukoizolyacionnie-pliti-ekozvukoizol.html
  • grade.bystrickaya.ru/mihail-mihajlovich-bahtin-ili-poetika-kulturi-na-putyah-k-gumanitarnomu-razumu-stranica-6.html
  • kontrolnaya.bystrickaya.ru/rabochaya-programma-dlya-studentov-specialnosti-290900-stroitelstvo-zheleznih-dorog.html
  • turn.bystrickaya.ru/osnovnie-ponyatiya-temi-uchebnoe-posobie-g-p-sinicina-vospitanie-sovremennogo-shkolnika-omsk-1999.html
  • tetrad.bystrickaya.ru/uchebno-metodicheskaya-karta-disciplini-socialnaya-antropologiya.html
  • urok.bystrickaya.ru/pr-pn-kladbishe-otnositsya-k-novim-mezhdunarodnoj-nauchno-prakticheskoj-konferencii-sovremennie-podhodi-k-upravleniyu.html
  • uchebnik.bystrickaya.ru/uchebnoe-posobie-omsk-2009-federalnoe-agentstvo-po-obrazovaniyu.html
  • © bystrickaya.ru
    Мобильный рефератник - для мобильных людей.