.RU

В 2 лияние ионов двухвалентнных металлов на активность металлопротеиназы MprBi



^ В
2
лияние ионов двухвалентнных металлов на активность металлопротеиназы MprBi

Изучение влияния ионов двухвалентных металлов на активность фермента показало, что ионы Са2+ и Mg2+ в концентрации 10 мМ повышают активность белка на 30 и 20% соответственно. Ионы Со2+, Сu2+ и Ni2+ в концентрациях от 1 до 20 мМ снижают активность металлопротеиназы, причем, с увеличением концентрации это снижение более значительно. Низкие концентрации ионов Zn2+ (0,01 мМ) практически не влияют на активность фермента, увеличение же его концентрации приводит к резкому снижению активности (рис. 10)


1 2 3 4 5 6


Рис. 10. Влияние ионов двухвалентных металлов на активность металлопротеиназы MprBi. За 100% принимали активность белка в отсутствии в реакционной смеси ионов металла. 1 – Zn2+; 2- Ca2+; 3 – Mg2+; 4 – Co2+; 5 – Cu2+; 6 – Ni2+;


Таким образом, в результате проведенной работы был получен гомогенный препарат металлоэндопептидазы MprBi, секретируемой рекомбинантным штаммом B. subtilis BG 2036 (pSA1). На основании определения и анализа первичной структуры MprBi установлено, что исследуемая нами рекомбинантная металлопротеиназа относится к семейству адамализинов/репролизинов клана метцинкинов класса цинкзависимых протеиназ и является первым представителем данного семейства у прокариот в целом и у бацилл в частности. Однако, структурные особенности этого фермента (Tyr в Met повороте и N-концевой Ala1) сближают его с эндопептидазами астацинового семейства. Возможно, подобное смешение признаков является ключевой особенностью бациллярных адамализиноподобных эндопептидаз.


ВЫВОДЫ

  1. Подобран состав питательной среды, обеспечивающий высокий уровень продукции металлоэндопептидазы B. intermedius в культуральной жидкости рекомбинантного штамма B. subtilis.

  2. Выделена и очищена гомогенная металлоэндопептидаза MprBi со степенью очистки 350 и выходом 11,3%. Молекулярная масса металлоэндопептидазы составляет 19 kDa.

  3. Методом MALDI-TOF спектрометрии установлена аминокислотная последовательность MprBi, определена N-концевая последовательность зрелого фермента. Фермент классифицирован как металлоэндопептидаза семейства адамализинов/репролизинов клана метцинкинов цинкзависимых металлопротеиназ.

  4. Установлено, что металлопротеиназа MprBi обладает широкой субстратной специфичностью по гидролизу синтетических и природных субстратов.

  5. Установлено, что металлоэндопептидаза MprBi является щелочным термостабильным ферментом, активность которого зависит от присутствия ионов двухвалентных металлов. рН-Оптимум действия фермента лежит к области рН 8,0, интервал стабильности MprBi 22-55 ºС.


Работы, опубликованные по теме диссертации


  1. Mikhailova, E.O. Purification of a subtilisin-like serine proteinase from recombinant Bacillus subtilis during different phases of growth / E.O. Mikhailova, N.P. Balaban, A.M. Mardanova, N.L. Rudakova, O.N. Ilyinskaya, G.N. Rudenskaya, A.A. Rizvanov, M.R. Sharipova // Annals of Microbiology, - 2009 – V.59,№2, - P.301-307.

  2. Балабан, Н.П. Металлоэндопептидазы клана метцинкинов: классификация, свойства, структурные особенности / Н.П. Балабан, Н.Л. Рудакова, А.Р. Сабирова, О.Н. Ильинская, М.Р. Шарипова // Учен. зап. Казан. ун-та. Сер. Естеств. науки. – 2010. – Т.152, кн.2. – С. 57-77.

  3. Рудакова, Н.Л. Секретируемая металлоэндопептидаза Bacillus intermedius: получение гомогенного препарата фермента и исследование физико-химических свойств / Н.Л. Рудакова, А.Р. Сабирова, А.Р. Каюмов, А.М. Марданова, Н.П. Балабан, М.Р. Шарипова // Учен. зап. Казан. ун-та. Сер. Естеств. науки. – 2010. – Т.152, кн.2. – С. 145-154.

  4. Рудакова, Н.Л. Характеристика цинкзависимой эндопептидазы Bacillus intermedius / Н.Л. Рудакова, Н.П. Балабан, Ю.В. Данилова, Г.Н. Руденская, М.Р. Шарипова // Биохимия. – 2010. – Т.75,№10. – С.1462-1470.

  5. Sabirova A.R., Rudakova N.L. A novel secreted metalloproteinase Bacillus intermedius / A.R. Sabirova, N.L. Rudakova, N.P. Balaban, O.N. Ilinskaya, I.V. Demiduyk, S.V. Kostrov, G.N. Rudenskaya, M.R. Sharipova // FEBS letters. – 2010. – V.584, №21. – P.4419-4425.

  6. Рудакова, Н.Л. Протеиназы Bacillus intermedius 3-19 на поздних стадиях роста / Н.Л. Рудакова, Е.А. Соколова, Н.П. Балабан // Тезисы докладов IV научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов научно-образовательного центра Казанского государственного университета «Материалы и технологии XXI века». – Казань, 2004. – С.66.

  7. Соколова, Е.А. Каталитические и биологические свойства субтилизинов Bacillus intermedius 3-19 / Е.А. Соколова, Н.Л. Рудакова, Е.Л. Ицкович, Н.П. Балабан, М.Р. Шарипова // Материалы научной конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии». – Казань, 2004. –С.24.

  8. Рудакова, Н.Л. Влияние компонентов питательной среды на продукцию субтилизина Bacillus intermedius 3-19 поздней стационарной фазы роста / Н.Л. Рудакова, Е.А. Соколова, Н.П. Балабан, А.М. Марданова, М.Р. Шарипова // Материалы научной конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии». – Казань, 2004. –С.73.

  9. Рудакова, Н.Л. Протеиназы Bacillus intermedius 3-19 на поздних стадиях роста / Н.Л. Рудакова, Е.А. Соколова // Материалы XLII международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс». – Новосибирск, 2004. – С.33. (Диплом III степени)

  10. Рудакова, Н.Л. Среда для биосинтеза металлопротеиназы Bacillus intermedius рекомбинантным штаммом Bacillus subtilis / Н.Л. Рудакова, Е.А. Соколова, Н.П. Балабан, М.Р. Шарипова // Материалы V республиканской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Наука. Инновации. Бизнес». – Казань, 2005. – С.66.

  11. Рудакова, Н.Л. Получение металлопротеиназы Bacillus intermedius из культуральной жидкости рекомбинантного штамма Bacillus subtilis / Н.Л. Рудакова, Н.П. Балабан, М.Р. Шарипова // Тезисы докладов и стендовых сообщений VI симпозиума «Химия протеолитических ферментов». - Москва, 2007. - С.76.

  12. Рудакова, Н.Л. Гетерологичная экспрессия гена нейтральной протеазы Bacillus intermedius в клетках Bacillus subtilis / Н.Л. Рудакова, А.Р. Сабирова, Н.П. Балабан, М.Р. Шарипова // Материалы конференции «Ломоносов-2007». – Москва, 2007. – С.18.

  13. Рудакова, Н.Л. Выделение и очистка металлопротеиназы B. intermedius из культуральной жидкости рекомбинантного штамма B. subtilis BG 2036 / Н.Л. Рудакова, Ю.В. Данилова // Материалы конференции «Ломоносов-2009». – Москва, 2009. – С.11.

  14. Рудакова, Н.Л. Новая металлопротеиназа Bacillus intermedius / Н.Л. Рудакова, А.Р. Сабирова, Ю.В. Данилова, Н.П. Балабан, М.Р. Шарипова // Тезисы докладов IV Российского симпозиума «Белки и пептиды». – Казань, 2009. – С.298. (Грамота за лучший доклад).

  15. Шарипова, М.Р. Особенности регуляции функциональной активности и экспрессии генов протеиназ в условиях стресса у бацилл / М.Р. Шарипова, А.А. Тойменцева, А.Р. Каюмов, А.Р. Сабирова, Н.Л. Рудакова, Н.П. Балабан // Тезисы докладов IV Российского симпозиума «Белки и пептиды». – Казань, 2009. – С.96.

  16. Рудакова, Н.Л. Новая секретируемая металлоэндопептидаза Bacillus intermedius / Н.Л. Рудакова, Н.П. Балабан // Тезисы докладов Российской школы молодых ученых «Актуальные проблемы современной биохимии и молекулярной биологии». – Казань, 2010. – С.50.

voprosi-i-zadaniya-prednaznacheno-posobie-uchitelyam-predmetnikam-6-11-klassov-obsheobrazovatelnih-shkol-klassnim.html
voprosi-i-zadaniya-stranica-10.html
voprosi-i-zadaniya-stranica-16.html
voprosi-i-zadaniya-stranica-21.html
voprosi-i-zadaniya-uchebnaya-programma-po-kursu-politologiya-dlya-vseh-specialnostej-ochnogo-otdeleniya-ochnoe-otdelenie.html
voprosi-i-zadaniya-uchebnoe-posobie-izdanie-trete-dopolnennoe-i-pererabotannoe-dopusheno-ministerstvom-obrazovaniya.html
  • pisat.bystrickaya.ru/tema-7-sposobi-kommunikacij-zhivotnih-uchebno-metodicheskij-kompleks-kazan-2009-udk-bbk-p-rekomendovano-k-izdaniyu.html
  • uchenik.bystrickaya.ru/-5-na-frontah-pervoj-mirovoj-vojni-novejshaya-istoriya-zarubezhnih-stran-xx-vek-uchebnik-dlya-uchashihsya-9-klassa.html
  • pisat.bystrickaya.ru/tekst-vzyat-s-psihologicheskogo-sajta-stranica-7.html
  • tetrad.bystrickaya.ru/variant-4-prakticheskaya-rabota-1.html
  • learn.bystrickaya.ru/glava-xlvii-o-nenadezhnosti-nashih-suzhdenij-kniga-pervaya.html
  • composition.bystrickaya.ru/polnota-realizacii-programm-po-predmetam-federalnogo-komponenta-informacionnaya-karta-obsheobrazovatelnogo-uchrezhdeniya.html
  • college.bystrickaya.ru/3-rekomenduemaya-literaturai-metodicheskie-ukazaniya-po-ee-ispolzovaniyu.html
  • college.bystrickaya.ru/3linguistic-features-of-germanic-languages-uchebno-metogdicheskij-kompleks-disciplini-dpp-f-02-istoriya-yazika.html
  • institute.bystrickaya.ru/glavnaya-kniga-hozyajstvennij-uchet-v-sisteme-upravleniya-obshaya-harakteristika-buhgalterskogo-ucheta-zakonodatelnoe.html
  • books.bystrickaya.ru/chikago-vzbudorazhen-zvezda-ili-vozdushnij-korabl-chikago-i-prigorodi-proyavlyayut-ogromnij-interes-teper-eto-pochti-edinstvennaya-tema-vseh-razgovorov.html
  • essay.bystrickaya.ru/dinamicheskij-diapazon-lestnichnih-polosovih-aktivnih-filtrov-s-poelementnoj-imitaciej.html
  • testyi.bystrickaya.ru/administrativnaya-otvetstvennost-za-korrupcionnie-deyaniya-po-zakonodatelstvu-ukraini-chast-7.html
  • testyi.bystrickaya.ru/4napravlenie-4-rukovodyashij-dokument-rd-po-proceduram-podtverzhdeniya-sootvetstviya-programmnih-sistem-trebovaniyam-spo.html
  • notebook.bystrickaya.ru/issledovanie-zakanchivaetsya-mozhno-dazhe-skazat-obrivaetsya-na-31-yanvarya-1942-goda-vozmozhno-prichini-tomu-bili-chisto-politich-stranica-43.html
  • portfolio.bystrickaya.ru/polozhenie-o-poryadke-provedeniya-gosudarstvennoj-itogovoj-attestacii-uchashihsya.html
  • student.bystrickaya.ru/13-obekti-sudebnoj-ekspertizi-kniga-sudi-sudebnaya-ekspertiza-prospekt.html
  • school.bystrickaya.ru/bulgakov-m-a-ricarskoe-sluzhenie-lyudyam-po-povesti-zapiski-yunogo-vracha.html
  • occupation.bystrickaya.ru/moskva-mezhdunarodnij-seminar-dostupnost-bezopasnogo-aborta-i-kontracepcii-problemi-obshestvennogo-zdravoohraneniya.html
  • znaniya.bystrickaya.ru/publichnij-doklad-direktora-municipalnogo-obsheobrazovatelnogo-uchrezhdeniya-stranica-2.html
  • occupation.bystrickaya.ru/mikro-uroven-rekomendacii-35-makro-uroven-36-otraslevoj-uroven-39-mikro-uroven-44-monitoring-i-ocenka-47.html
  • shpora.bystrickaya.ru/zakon-rasshepleniya-smisla-upravlencheskoj-informacii-uchebnik-dlya-vuzov.html
  • vospitanie.bystrickaya.ru/zakonodatelstva-po-teme-buhgalterskij-uchet-stranica-12.html
  • student.bystrickaya.ru/23-ocenka-organizacii-vnutrennego-kontrolya-raschetov-s-postavshikami-i-podryadchikami-na-predpriyatii-oao-n-skenergosbit.html
  • report.bystrickaya.ru/kniga-mira-kniga-mira.html
  • esse.bystrickaya.ru/raspisanie-zanyatij-na-vesnu-2009.html
  • writing.bystrickaya.ru/ak-gastev-i-alternativnaya-pedagogika-20-h-gg-xx-veka-chast-2.html
  • shpargalka.bystrickaya.ru/uchebno-metodicheskoe-posobie-stavropol-2007-bbk-51-1-2-udk-614-12-06-stranica-9.html
  • literatura.bystrickaya.ru/sekciya-metodi-statisticheskogo-modelirovaniya-estestvennih-tehnicheskih-i-socialno-ekonomicheskih-obektov-i-zadachi-optimalnogo-upravleniya-.html
  • znaniya.bystrickaya.ru/proizvodstvennij-potencial-promishlennost-programma-socialno-ekonomicheskogo-razvitiya-municipalnogo-obrazovaniya.html
  • school.bystrickaya.ru/glava-vosmaya-bibliograficheskij-ukazatel.html
  • tetrad.bystrickaya.ru/uroka-po-pp-tema-uroka-data.html
  • testyi.bystrickaya.ru/alfavitno-predmetnij-ukazatel-stranica-23.html
  • school.bystrickaya.ru/dovedennya-logchne-mislennya-u-kontekst-nnovacjnogo-upravlnnya.html
  • institut.bystrickaya.ru/tema-6-kejnsianstvo-istoriya-ekonomicheskih-uchenij-celi-i-zadachi-kursa.html
  • klass.bystrickaya.ru/alber-kamyu-chuma-stranica-3.html
  • © bystrickaya.ru
    Мобильный рефератник - для мобильных людей.